第204章 医学泰斗(1/5)
孙长明就像个路过的NPC,丢下几句毫无杀伤力的台词后就自己退场了。关于无能的丈夫这一块…………………
陈浩还要说:“好像看见孙教授关门的时候捂着胸口,不会有事吧?”
易向晚:“没事,应当是受了点内伤,回去休养几天就好了,咱们继续工作吧。”
陈浩和易向晚,人走了还要补刀!
而且刚才正是陈浩一脸无辜地提出字字诛心的问题。
这个陈浩,怎么这么坏啊!
重新开始实验。
NanoDrop上几组数据都很完美。
王晓晴乖巧请教:“江河,接下来怎么做?”
目前浓度和纯度虽然达标了,但miRNA片段太短。
传统的逆转录实验,一般都是用oligo(d)引物去抓mRNA尾巴上的Poly-A结构。
可是miRNA根本没有这种长尾巴,常规的逆转录引物根本抓不住它。
这在08年又是一个技术难题。
全世界的实验室都在寻找一种高效特异的办法,把这短短二十几个碱基的片段给稳定地逆转录出来。
江河道:“之前讲过茎环引物,当然,后入组的组员来得晚不知道,陈浩,你给大家简单讲讲。”
“ok啊。”
陈浩道:“这个引物分为两部分,后面是一个能够自我互补打折形成的茎环结构,它的作用是提供空间位阻,增加稳定性;前面伸出来一小段,大概6到8个碱基,这段序列和我们要抓的特异性miRNA的3端完全互补。”
王晓晴点点头:“明白了,引物前端这几个碱基先跟miRNA的尾巴精准结合,然后逆转录酶就可以用这个双链结构作为起始点,一路把miRNA的互补链给合成出来。”
杨煦很想插嘴装逼。
可这一段江河还没教他。
他也不会啊。
只能悻悻放弃。
陈浩则感觉很爽。
—没想到吧!自己也有给教授上课的一天!
他笑了笑,接着说:
“不仅如此,茎环结构在室温下是折叠闭合的,只有在结合了目标miRNA后才会打开,这会极大降低引物结合到其他杂质RNA上的概率,特异性会呈指数级上升。”
陆晓林补充:“对了,引物序列老大已经设计好了,今天早上刚送到。”
他拉开旁边的一个抽屉,拿出一排装在冰盒里的离心管。
江河看了眼,点点头道:“现在配置逆转录体系,16度30分钟让引物结合,42度30分钟逆转录,最后85度5分钟灭活酶。”
“收到!”
一个多小时后。
逆转录程序跑完,酶被灭活。
接下来是最紧张的验证环节。
上机,跑qPCR(实时荧光定量PCR)。
众人屏息凝神,迅速配好荧光定量体系,将满载着希望的八排管放进了旁边那台ABI7500定量PCR仪中。
显示器。
第18个循环。
荧光信号突然爆发,拉出了一道完美平滑的扩增曲线!
一个多小时后,40个扩增循环全部结束,机器进入最后的升温阶段。
紧接着跑出来的熔解曲线,呈现出极为漂亮的单一峰型!
这意味着,
江河团队极其精准地抓住了miRNA,